产品简介： 

本产品是采用 SYBR Green I 嵌合荧光法进行Real Time PCR的专用试剂，将热启动Taq DNA 聚合酶、dNTP、SYBR Green I 等试剂预混成即用的 2x Mix，可对目标 cDNA 进行快 速并具有高特异性的定量检测。采用抗体法热启动 Taq 酶，高温加热前，抗 Taq 单克隆抗体 与 Taq 酶紧密结合，抑制 Taq 的聚合酶活性，从而抑制在低温条件下出现的由引物和模板 DNA 非特异性杂交或引物二聚体引起的非特异性扩增。抗体会在 PCR 反应的预变性步骤中 完全失活，不会干扰后续的 Taq 酶聚合反应，大大提高了 PCR 反应的灵敏度及特异性。2x 浓度预混反应体系，最大限度地减少人为误差、降低污染机率、节约实验操作时间，快速简 便、通用性广、灵敏度高、特异性强、稳定性好。 

产品组分：

保存条件：
收到本产品后，请立即置于-20℃避光保存，一年有效。从-20℃取出使用时，将冻存的
Universal SYBR qPCR Mix 和 ROX Reference Dye 融解，然后轻轻颠倒混匀，待溶液完全均
一后再行使用。如需一段时间内经常取用，可在 2～8℃条件下储存 3 个月。避免反复多次
冻融。

使用说明： 一、配制 Real-Time PCR 反应体系： 

1、将所有试剂 2×Universal SYBR qPCR Mix，ROX Reference Dye，模板，引物和 RNase-Free ddH2O，在室温下融解并彻底混匀，避免产生气泡。短暂离心后，置于冰上按照下表配制反 应液。

* 一般来说反应体系中引物终浓度为 0.2 uM 即可得到较好的扩增效果。当反应性能比较差时，可以在终 浓度 0.2~0.4 uM 范围内调整引物浓度，为获得理想的 qPCR 效果，扩增片段的长度建议为 80-200bp。 ** 模板量：10-100 ng 基因组 DNA，或 1-10 ng cDNA 为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝 数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。另外，Two Step RT-PCR（两步法反转录） 反应的 cDNA（RT 反应液）作为模板时的添加量不要超过 PCR 反应液总体积的 10%。 

2、盖上或密封反应管/PCR 板，轻轻混匀。短暂离心，确保所有组分都在管/板底。

二、进行 Real-Time PCR 反应 1、建议采用两步法 PCR 反应程序进行反应。

若模板量较低等因素导致扩增效果不佳，或者对于超过 350 bp 或者高 GC 含量的扩增子， 建议增加延伸时间至 60 s 或者采用三步法以提高扩增效率。

注：本产品是使用抗体修饰的 HotStart DNA 聚合酶，，如果在 PCR 反应前进行模板的预变性，通常设定 为 95℃、2 min，复杂或高 GC 模板适当延长时间至 5 min。 以上举例为常规 qPCR 反应系统，仅供参考。实际反应条件因模板、引物等的结构不同而有所差异，需根 据模板、引物、目的片段的特点设定最佳反应条件，并根据比例放大或缩小反应体系。

2、上机检测：将反应体系置于荧光定量 PCR 仪中，运行程序收集数据并分析结果。