产品简介:
本产品是采用 SYBR Green I 嵌合荧光法进行Real Time PCR的专用试剂,将热启动Taq DNA 聚合酶、dNTP、SYBR Green I 等试剂预混成即用的 2x Mix,可对目标 cDNA 进行快 速并具有高特异性的定量检测。采用抗体法热启动 Taq 酶,高温加热前,抗 Taq 单克隆抗体 与 Taq 酶紧密结合,抑制 Taq 的聚合酶活性,从而抑制在低温条件下出现的由引物和模板 DNA 非特异性杂交或引物二聚体引起的非特异性扩增。抗体会在 PCR 反应的预变性步骤中 完全失活,不会干扰后续的 Taq 酶聚合反应,大大提高了 PCR 反应的灵敏度及特异性。2x 浓度预混反应体系,最大限度地减少人为误差、降低污染机率、节约实验操作时间,快速简 便、通用性广、灵敏度高、特异性强、稳定性好。
产品组分:
保存条件:
收到本产品后,请立即置于-20℃避光保存,一年有效。从-20℃取出使用时,将冻存的
Universal SYBR qPCR Mix 和 ROX Reference Dye 融解,然后轻轻颠倒混匀,待溶液完全均
一后再行使用。如需一段时间内经常取用,可在 2~8℃条件下储存 3 个月。避免反复多次
冻融。
使用说明: 一、配制 Real-Time PCR 反应体系:
1、将所有试剂 2×Universal SYBR qPCR Mix,ROX Reference Dye,模板,引物和 RNase-Free ddH2O,在室温下融解并彻底混匀,避免产生气泡。短暂离心后,置于冰上按照下表配制反 应液。
* 一般来说反应体系中引物终浓度为 0.2 uM 即可得到较好的扩增效果。当反应性能比较差时,可以在终 浓度 0.2~0.4 uM 范围内调整引物浓度,为获得理想的 qPCR 效果,扩增片段的长度建议为 80-200bp。 ** 模板量:10-100 ng 基因组 DNA,或 1-10 ng cDNA 为参照,因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝 数不同,可对模板进行梯度稀释,以确定最佳的模板使用量。另外,Two Step RT-PCR(两步法反转录) 反应的 cDNA(RT 反应液)作为模板时的添加量不要超过 PCR 反应液总体积的 10%。
2、盖上或密封反应管/PCR 板,轻轻混匀。短暂离心,确保所有组分都在管/板底。
二、进行 Real-Time PCR 反应 1、建议采用两步法 PCR 反应程序进行反应。
若模板量较低等因素导致扩增效果不佳,或者对于超过 350 bp 或者高 GC 含量的扩增子, 建议增加延伸时间至 60 s 或者采用三步法以提高扩增效率。
注:本产品是使用抗体修饰的 HotStart DNA 聚合酶,,如果在 PCR 反应前进行模板的预变性,通常设定 为 95℃、2 min,复杂或高 GC 模板适当延长时间至 5 min。 以上举例为常规 qPCR 反应系统,仅供参考。实际反应条件因模板、引物等的结构不同而有所差异,需根 据模板、引物、目的片段的特点设定最佳反应条件,并根据比例放大或缩小反应体系。
2、上机检测:将反应体系置于荧光定量 PCR 仪中,运行程序收集数据并分析结果。